生信菜鸟屋 发表于 2024-6-6 20:38:37

二代测序原理

在介绍生物信息分析时,我觉得大家有必要先了解一下关于二代测序的相关知识(主要是目前二代测序比较流行)。

现在所进行的测序主要是illumina公司的测序仪进行的测序。其主要的原理其实很简单:以一条DNA为模板链进行另外一般DNA的合成,同时每添加一个碱基就会发一个碱基独有的光,然后对其进行拍照得到光信号;随后使用相关软件把光信号转变为碱基,如下图。


接下来就介绍一下illumina测序仪的文库结构,如下图。可以看到P5端(橙色),P7端(绿色)的序列,这个序列是为了把这个DNA分子固定在测序芯片上(芯片上有与其反向互补的序列)。随后就是index1和index2,这两个序列的作用主要就是用来区分样本;一般情况下一张芯片可以测序4000G的数据量,不太可能只有你的一个样本;因此在这张芯片上会有其他人的样本一起进行测序,因此这个index就可以用来区分不用的样本。随后在index1和index2后面还有一小段序列(称之为接头),这里就是结合测序引物的序列。引物集合在这里就可以对后面的插入片段(就是你想知道的片段的序列)进行测序了。


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